PREPARACIÓN DE GEL DE AGAROSA

DÍA 1: ENSAYO DE TINCIÓN DEL GEL DE AGAROSA

Realizamos una tinción de ensayo con los pocillos con danablue.
Usemos gel sintético y se vertió agua destilada en la cabina de electroforesis y con la micropipeta fuimos haciendo una práctica para aprender a poner el colorante correctamente dentro de los pocillos aunque resultó algo difícil porque al no tener el tampón de sacarosa no se adhería bien al fondo y se resuspendía varias veces.
Es importante tener en cuenta que no se debe pulsar demasiado rápido el émbolo pues se saldría el danablue, también cabe añadir que no se debe sumergir demasiado la punta de la pipeta pues se saldría el contenido, además el émbolo se debe pulsar despacio para una buena realización.
También realizamos un ensayo con la fuente de alimentación en la que aprendimos a cambiar los amperios, el tiempo, etc..

Es importante recordar que hay que tapar la cubeta antes de conectarla a la
fuente de alimentación

DÍA 2: PREPARACIÓN DE GEL DE AGAROSA

OBJETIVO:

Nuestro objetivo es preparar un gel de agarosa que permita separar moléculas de ADN mediante electroforesis, ya que íbamos a realizar una PCR para la determinación del grupo Rh.

MATERIAL NECESARIO:

• Agarosa.
• Tampón de electroforesis 1x
• Danablue
• Agua destilada.
• Balanza
• Cama para el gel y topes.

PROCEDIMIENTO:

Primeramente se prepara el molde para hacer los geles y se cierran los extremos con los topes para que no se salga la agarosa, después se coloca el peine para formar los pocillos.

Tras ello se prepara el gel: en primer lugar necesitamos un vaso de precipitados de 1000 mL para preparar la solución del gel. Pero se debe medir con una probeta, ya que los vasos de precipitados no son los idóneos para medir.

Luego añadimos 225 mL de tampón de electroforesis (TAE) 1X más 2,14 gramos de agarosa y se agita la mezcla para disolver los grumos de agarosa, nos ayudamos con una varilla, se añadieron con 900 mL de agua destilada para reducir dicha concentración de tampón a 1X.

NOTA: dichas cantidades varían en función de la cantidad a realizar, en el caso de nuestro grupo al tener un molde más grande nuestras medidas fueron más grandes.

Luego se calentó la mezcla en el microondas para disolver la agarosa, durante unos 5 minutos, aunque fuimos probando diversos tiempos para evitar salpicaduras indeseadas, así que fuimos poniendo el microondas a intervalos de 1 minuto, durante 5 veces, hasta que la solución estaba al punto de ebullición, la solución final apareció clara sin partículas aparentes y se le añade 10 µL de danablue.

Luego se enfría la solución de agarosa más o menos a 55 ºC, que para acelerar esto colocamos el envase debajo de un grifo con agua y agitamos, además hay que añadirle el danablue, se emplearon 10 µL . Luego dicha mezcla se colocó en el molde con el peine ya colocado y se dejó solidificar hasta que formó el gel.

Gel de agarosa aún sin solidificar