El objetivo de esta práctica es realizar la extracción de ADN de células de descamación del epitelio mucoso del interior de la boca, con la finalidad de conservarlo tras su extracción a -70 ºC.
MATERIAL:
- Agua destilada.
- Varilla de vidrio.
- Vasos desechables
- Tubos eppendorf.
- Alcohol de 96º muy frío
- Sal común.
- Tubo de ensayo.
- Alcohol de 70º
- Asas de siembra
- Detergente lavavajillas
- Gradilla.
PROCEDIMIENTO
Lo primero que realizamos fue preparar en un vaso unos 20 mL de agua destilada (que lo medimos con ayuda de una probeta), sobre la que añadimos dos pizcas de sal y un par de gotas de detergente lavavajillas.
A continuación se puso un poco de agua destilada en un vaso de plástico y nos enjuagamos vigorosamente la boca durante un minuto más o menos para arrastrar de esta forma la mayo cantidad posible de células de descamación, para ello es recomendable tragar saliva previamente para eliminar la acción de enzimas que haya contenidas en ella.
Tras el enjuague se expulsó el agua en el vaso en el que habíamos preparado previamente la solución con detergente lavavajillas, y lo dejamos ahí durante 10 minutos, removiéndolo de vez en cuando para disolver componentes, pero no demasiado rápido para evitar la formación de espuma.
A continuación se añadió la solución suavemente en un tuvo de ensayo al cual se le añadió alcohol muy frío dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado. Así, lo dejamos reposar durante 2 o 3 minutos pero sin remover nada.
Tras estos minutos el ADN tiende a subir hacia la superficie del alcohol, y una vez que subió lo recogimos con ayuda de un asa de siembra
A continuación se suspende el ADN extraído en un eppendorf con alcohol de 70º
NOTA: el alcohol de 96º lo dejamos en la nevera hasta que fue necesario para, de esta forma conservarlo lo más frío posible.
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